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原載自：www.qszkrm.cn[技術資料頻道] 2022-03-02 瀏覽次數：1250

　　ATCC細胞培養時通過在支持物（如蓋玻片）上培養貼壁細胞，可以應用抗體檢測細胞表面抗原的表達或進行酶細胞化學以及免疫細胞化學檢測。該方法的優點是細胞貼壁牢固，能夠維持細胞生長時的狀態。

　　ATCC細胞的冷凍保存方法：

　　傳統方法是冷存管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16-18小時（或隔夜）→液氮槽長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

　　程序降溫則利用已設定程序的等速降溫機以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽長期儲存。適用于懸浮型細胞之保存。

　　那么ATCC細胞又如何解凍呢？

　　1.冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害，導致細胞之死亡。

　　2.細胞活化后，約需數日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現才會恢復正常。

　　3.材料：37℃恒溫水槽、新鮮培養基、無菌吸管/離心管/培養瓶、液氮或干冰容器。

　　4.主要步驟：

　　①操作人員應戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害；

　　②自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易松掉；

　　③將新鮮培養基置于37℃水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內；

　　④取出冷凍管，立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部，移入無菌操作臺內；

　　⑤取出解凍之細胞懸浮液，緩緩加入有培養基之培養容器內（稀釋比例為1：10-1：15），混合均勻，放入CO2培養箱培養。取0.1ml解凍細胞懸浮液作存活測試；

　　⑥解凍后是否立即去除冷凍保護劑（如DMSO），依細胞種類而異，一般而言，大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除，則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10ml培養基之離心管內，離心1000rpm，5分鐘，移去上清液，加入新鮮培養基，混合均勻，放入CO2培養箱培養；

　　⑦若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養后隔日更換培養基。